胰島素是由胰臟內的胰島β細胞受內源性或外源性物質如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一種蛋白質激素。
(一)胰島素的結構:
胰島素是由51個氨基酸組成的蛋白質,含有2條肽鏈,氨基酸的連線方式是脫水縮合,這其間要失去49分子的水,形成49個肽鍵;胰島素分子中至少含有2個-COOH和2個-NH2;若一個氨基酸的平均分子量是128,那麼胰島素的分子量大約是5646。
(二)胰島素的合成及分泌:
1.胰島素是分泌蛋白,其合成是在胰島B細胞中的核糖體上進行的,與其合成及分泌相關的細胞器有核糖體、內質網、高爾基體、線粒體(注意掌握各細胞器所起的作用);其合成及分泌的途徑是:核糖體→內質網→高爾基體→細胞膜→胞外;該物質出入細胞的方式為外排作用。
2.控制胰島素合成的基因是真核細胞基因,其結構包括編碼區和非編碼區,非編碼區對編碼區的表達起調控作用,編碼區包括內含子和外顯子。
3.基因控制胰島素的合成包括轉錄和翻譯過程。在控制胰島素合成的基因中,至少含有306個脫氧核苷酸;該過程中約需要51個tRNA,mRNA中大約有153個核糖核苷酸、51個密碼子。
4.人體內合成胰島素所需要的原料-氨基酸的來源途徑有:腸道吸收、自身蛋白質的分解、氨基轉換作用(其它物質的轉變)等。
(三)胰島素的作用及異常:
1.胰島素的生理作用是:調節糖類代謝,降低血糖含量,促進血糖合成為糖元,抑制非糖物質轉化為葡萄糖,從而使血糖含量降低。在血糖平衡調節中,胰島素的分泌會抑制胰高血糖素的分泌,這兩種激素間的關係表現為拮抗作用;當人飢餓時,胰島素的分泌量會減少。
2.如果一個人持續性高血糖和糖尿,可能的原因是腎功能發生障礙或患糖尿病。如果是前者,原因是由於腎小管不能有效地將葡萄糖重吸收回血液,他的尿中就會出現葡萄糖,該吸收方式為主動運輸;如果是後者,其病因是胰島B細胞受損,導致胰島素分泌量過少,從而促進肝糖元的分解,促進非糖物質的轉化,使葡萄糖進入組織細胞和在細胞內氧化利用發生障礙,從而導致血糖含量高於160~180mg/dL。
鑑定尿糖一般用班氏試劑,如果尿中有糖的話,加熱後溶液的顏色將由藍色變成磚紅色沉澱;患者的主要症狀是多食、多尿、多飲、口渴、機體消瘦、體重減輕等,其中涉及到肝臟、胰腺、腎臟等器官的參與;臨床中用該種激素治療糖尿病,只能注射,不能口服,原因是胰島素是蛋白質,口服後被消化分解,失效。
(四)胰島素的生產:
過去用來治療糖尿病的胰島素主要是從動物體的器官、組織中提取,由於產量很低,不利於推廣。現在利用發酵工程的方法生產胰島素,不僅大大提高了產量,而且還降低了成本。
1.菌種的選育:
能夠產生胰島素的大腸桿菌是利用基因工程技術獲得的,這種細菌又叫做工程菌,其構建過程是:
①提取目的基因:可採用人工合成基因方法獲得。
②目的基因與運載體結合:基因工程中最常用的運載體是質粒,它是存在於細菌的染色體外並能夠自主複製的環形DNA分子,在這個過程中需要使用的酶有限制性內切酶和DNA連線酶。
③把目的基因匯入受體細胞:這個過程中一般用要CaCl2處理細菌的細胞壁,目的是增大細胞壁的通透性。
④目的基因的檢測與表達:大腸桿菌能利用人的胰島素基因合成胰島素,說明了生物共用一套密碼子。
(2)培養基的配製:
①不僅營養成分要全,即包括碳源、氮源、生長因子、水、無機鹽,而且原料應根據微生物的代謝特點來進行選擇,即從同化作用角度看,大腸桿菌的代謝型別為異養型,因此我們選擇碳源時應選擇含碳的有機物。
②工業生產上一般用的培養基型別為液體培養基。
(3)滅菌,是指殺死一定環境中所有微生物的細胞、芽孢和孢子,目的是防止雜菌的汙染,避免引起競爭。
(4)擴大培養和接種:應選用處於對數期的大腸桿菌做菌種,該時期的種群呈J型曲線增長。
(5)發酵階段:
①胰島素應屬於大腸桿菌的次級代謝產物,為了獲得更多的胰島素,應適當控制延長穩定期,一般採用連續培養的方法。該時期與上一個時期比較,菌體數目的增長趨向平緩,從其生存的無機環境來分析,原因是營養物質的消耗,有害代謝產物的積累、pH的變化等,從種群內個體之間的關係看,是由於種內鬥爭的加劇。該階段種群數量達到K值。
②在該階段還要注意嚴格控制溫度、pH、無氧等發酵條件。
(6)代謝產物的分離和提純:提取時應採用蒸餾、萃取、離子交換等方法進行。分離提純後的產品,還要經過質量檢查合格後,才能成為正式產品。
2.透過基因工程得到的工程菌――大腸桿菌的分裂方式為二分裂,其生殖型別屬於無性生殖中的分裂生殖。其細胞壁的成分是肽聚糖等。大腸桿菌與人體細胞相比主要區別是:大腸桿菌無成型的細胞核(或無核膜),人體細胞有成型的細胞核;大腸桿菌無除核糖體以外的其它細胞器,人體細胞中有各種細胞器等。該菌種的獲得採用的是基因工程育種,屬於定向的變異。
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