hplc原理及操作

高效液相色譜法的工作原理:

流動相透過高壓泵進入系統，樣品溶液透過注射器進入流動相，流動相載入到色譜柱(固定相)中。由於樣品溶液中各組分在兩相中的分配係數不同，經過兩相反覆吸附-解吸分配後，各組分的運動速度有很大的不同。它被分離成一個單獨的元件，然後依次從列中流出。當樣品濃度透過檢測器時，樣品濃度被轉換成電訊號並傳送給記錄器，資料以地圖的形式打印出來。

高效液相色譜儀操作步驟：

1).過濾流動相，根據需要選擇不同的濾膜。

2).對抽濾後的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。

3).開啟HPLC工作站(包括計算機軟體和色譜儀)，連線好流動相管道，連線檢測系統。

4).進入HPLC控制介面主選單，點選manual，進入手動選單。

5).有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進樣閥，需要在manual選單下，先點選purge，再點選start，沖洗時速度不要超過10ml/min。

6).調節流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點選injure，選用合適的流速，點選on，走基線，觀察基線的情況。

7).設計走樣方法。點選file，選取selectusersandmethods，可以選取現有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點選newmethod。選取需要的配件，包括進樣閥，泵，檢測器等，根據需要而不同。選完後，點選protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進樣前的穩流，一般2-5分鐘;b.基線歸零;c.進樣閥的loading-inject轉換;d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。

8).進樣和進樣後操作。選定走樣方法，點選start。進樣，所有的樣品均需過濾。方法走完後，點選postrun，可記錄資料和做標記等。全部樣品走完後，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩餘物。

9).關機時，先關計算機，再關液相色譜。

10).填寫登記本，由負責人簽字。