液相色譜柱應該怎樣清洗

1、反相色譜柱

分別用甲醇：水=90：10，純甲醇（HPLC級），異丙醇（HPLC級），二氯甲烷（HPLC級）等溶劑作為流動相，依次沖洗，每種流動相流經色譜柱不少於20倍的色譜柱體積，然後再以相反的次序沖洗。

2、正相色譜柱

分別用正己烷（HPLC級），異丙醇（HPLC級），二氯甲烷（HPLC級），甲醇（HPLC級）等溶劑做流動相，順次沖洗，每種流動相流經色譜柱不少於20倍的柱體積(異丙醇粘度大，可降低流速，避免壓力過高)。注意使用溶劑的次序不要顛倒，用甲醇沖洗完後，再以相反的次序沖洗至正己烷，所有的流動相必須嚴格脫水。

3、離子交換色譜柱

長時間在緩衝溶液中使用和進樣，將導致色譜柱離子交換能力下降，用稀酸緩衝溶液沖洗可以使陽離子柱再生，反之，用稀鹼緩衝溶液沖洗可以使陰離子柱再生。

另外，還可以選擇能溶解柱內汙染物的溶劑為流動相做正方向和反方向沖洗。但再生後的色譜柱柱效是不可能恢復到新柱的水平的，如果柱子裝反了，可以調回來，但可能會造成柱內擔體塌陷，在不得已的情況下儘量不要反裝色譜柱。

一般來說，所有的清洗方法都有類似的形式。所用的溶劑都是隨溶劑強度增加，經常後一個溶劑是非常疏水的(如醋酸乙酯甚至是烴) 可以用來溶解非極性物質如脂質和油類。我們必須保證一系列溶劑中每個溶劑都能與下一個溶劑互混。清洗過程要結束時，必須藉助一箇中等強度能互混的溶劑而回到原始溶劑系統。例如，異丙醇是一個非常好的作為中間步驟的溶劑，因為它能與正己烷或二氯甲烷互溶又能與水相溶劑互溶。但是異丙醇粘度非常大，必須確保較低的流速以免使泵壓過高。當然，如果使用紫外檢測器的話，避免溶劑在紫外區域有吸收，要不然需使用大量的溶劑沖洗才能使基線平穩。

液相色譜柱的清洗過程可以根據實際情況和需要進行調整，以下是一般的步驟：

1. 切換到一個非極性溶劑：在開始清洗之前，將溶劑系統切換到一個非極性溶劑，例如甲醇或乙腈。這有助於去除樣品殘留物和極性化合物。

2. 進行反洗流程：使用反洗流程，將溶劑以與逆向分析方向相反的方向透過色譜柱。這有助於去除懸浮顆粒和溶劑中其他不純物。

3. 清洗柱：根據色譜柱的型別和使用條件，選擇適當的清洗方法。

4. 重新平衡柱子：在清洗完成後，將溶劑系統切換回最初的分離條件，並執行一段時間以使柱子重新平衡。